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未知成分分析細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)的常見實(shí)驗(yàn)方法
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時(shí)間：2024-09-30 10:05:50
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細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)的常見實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物醫(yī)學(xué)研究中的重要內(nèi)容，對(duì)于藥物篩選、毒理學(xué)研究等領(lǐng)域具有重要意義。
以下介紹幾種常見的細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法：
一、MTT實(shí)驗(yàn)（噻唑藍(lán)比色法）
1. 原理：MTT實(shí)驗(yàn)是一種檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法；MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽）可被活細(xì)胞內(nèi)的線粒體酶還原成紫色結(jié)晶物甲簪，而死細(xì)胞無(wú)此功能；通過(guò)溶解結(jié)晶物，可測(cè)定吸光度，從而反映細(xì)胞增殖情況。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入MTT溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)4-6小時(shí)，棄去上清，加入DMSO溶解結(jié)晶；（4）酶標(biāo)儀測(cè)定570nm處的吸光度值。
二、CCK-8實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8）
1. 原理：CCK-8實(shí)驗(yàn)與MTT實(shí)驗(yàn)類似，但其使用的試劑為WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯偶氮)-5-(2,4-二硫唑基)）鹽；WST-8在細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶作用下產(chǎn)生黃色的甲簪，吸光度值與活細(xì)胞數(shù)量成正比。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入CCK-8溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)1-4小時(shí)，酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度值。
三、Brdu實(shí)驗(yàn)（5-溴脫氧尿嘧啶核苷酸實(shí)驗(yàn)）
1. 原理：Brdu是一種類似胸腺嘧啶的核苷酸，可摻入DNA合成過(guò)程中；通過(guò)檢測(cè)Brdu的摻入量，可以反映細(xì)胞增殖情況。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入Brdu溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間，固定細(xì)胞，加入抗Brdu抗體；（4）酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度值。
四、克隆形成實(shí)驗(yàn)
1. 原理：克隆形成實(shí)驗(yàn)是通過(guò)統(tǒng)計(jì)克隆形成率來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力；克隆形成率越高，細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，棄去上清，固定細(xì)胞，染色；（3）顯微鏡下計(jì)數(shù)克隆數(shù)，計(jì)算克隆形成率。
五、EdU實(shí)驗(yàn)（5-乙炔基-2'-脫氧尿嘧啶核苷酸實(shí)驗(yàn)）
1. 原理：EdU是一種新型的DNA標(biāo)記物，可替代Brdu進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)；EdU與DNA的親和力更高，檢測(cè)信號(hào)更穩(wěn)定。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入EdU溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間，固定細(xì)胞，加入熒光標(biāo)記的抗EdU抗體；（4）熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度。
六、LDH實(shí)驗(yàn)（乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)）
1. 原理：LDH是一種胞內(nèi)酶，當(dāng)細(xì)胞膜受損時(shí)，LDH會(huì)釋放到細(xì)胞外；通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)上清中的LDH活性，可以評(píng)估細(xì)胞毒性。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集上清；（3）加入LDH底物，酶標(biāo)儀測(cè)定490nm處的吸光度值。
七、中性紅攝取實(shí)驗(yàn)
1. 原理：中性紅是一種細(xì)胞活性染料，活細(xì)胞可將其攝入細(xì)胞內(nèi)；通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)中性紅的含量，可以評(píng)估細(xì)胞毒性。
2. 方法：（1）將細(xì)胞接種于96孔板，加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)；（2）培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入中性紅溶液；（3）繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間，棄去上清，溶解細(xì)胞內(nèi)的中性紅；（4）酶標(biāo)儀測(cè)定540nm處的吸光度值。
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