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HE染色提高染色效果的技巧分享
來(lái)源： 時(shí)間：2024-09-10 11:12:45 瀏覽：1689次

HE染色提高染色效果的技巧分享

 

HE染色（蘇木精-伊紅染色）是一種常用的組織學(xué)染色方法，廣泛應(yīng)用于病理學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域。提高HE染色效果，對(duì)于病理診斷和科學(xué)研究具有重要意義。

一、準(zhǔn)備工作

1. 組織固定：固定是染色成功的關(guān)鍵。使用10%中性甲醛溶液固定組織，固定時(shí)間一般為24小時(shí)。固定時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以確保組織結(jié)構(gòu)完整。

2. 脫水：脫水過(guò)程要徹底，避免組織內(nèi)殘留水分影響染色效果；建議使用梯度酒精（70%、80%、90%、95%、100%）進(jìn)行脫水。

3. 透明：使用二甲苯進(jìn)行透明處理，透明時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免組織過(guò)于脆弱。

4. 浸蠟：選用熔點(diǎn)適宜的石蠟進(jìn)行浸蠟，保證組織完全浸蠟。

二、切片制作

1. 切片厚度：切片厚度以4-6μm為宜，過(guò)厚或過(guò)薄都會(huì)影響染色效果。

2. 切片展平：切片在水中展平，避免皺褶和折疊。

3. 切片粘貼：使用粘附性較好的載玻片，確保切片牢固粘貼。

三、染色技巧

1. 蘇木精染色：

（1）充分氧化：蘇木精染液在使用前需充分氧化，使染液呈紫紅色。

（2）控制染色時(shí)間：染色時(shí)間根據(jù)組織類型和細(xì)胞成分進(jìn)行調(diào)整。一般染色時(shí)間為5-10分鐘，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核過(guò)度染色，時(shí)間過(guò)短則染色不充分。

（3）分化：使用1%鹽酸酒精進(jìn)行分化，分化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免細(xì)胞核褪色。

2. 伊紅染色：

（1）選用合適濃度的伊紅染液：一般使用1%的伊紅染液，濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)染色過(guò)深，過(guò)低則染色不充分。

（2）控制染色時(shí)間：伊紅染色時(shí)間一般為1-3分鐘，根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

四、脫水、透明、封片

1. 脫水：使用梯度酒精（95%、100%）進(jìn)行脫水，每個(gè)梯度酒精浸泡2-3次，每次1-2分鐘。

2. 透明：使用二甲苯進(jìn)行透明處理，透明時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免組織過(guò)于脆弱。

3. 封片：選用中性樹(shù)膠或加拿大樹(shù)脂進(jìn)行封片，封片時(shí)避免氣泡產(chǎn)生。

五、注意事項(xiàng)

1. 染液配制：嚴(yán)格按照配方配制染液，確保染液質(zhì)量。

2. 染液更新：定期更換染液，避免染液老化影響染色效果。

3. 室溫控制：染色過(guò)程中，保持室溫在18-25℃，避免溫度波動(dòng)影響染色效果。

4. 避光操作：在染色過(guò)程中，盡量避免強(qiáng)光照射，以免染料分解。

5. 清潔儀器：確保染色缸、載玻片等儀器清潔，避免雜質(zhì)影響染色效果。

六、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

1. 細(xì)胞核染色過(guò)深：適當(dāng)縮短蘇木精染色時(shí)間，加強(qiáng)分化。

2. 細(xì)胞質(zhì)染色過(guò)深：適當(dāng)縮短伊紅染色時(shí)間，降低伊紅染液濃度。

3. 染色不均勻：檢查切片展平情況，確保切片均勻接觸染液。

4. 組織脫落：檢查切片粘貼情況，確保切片牢固粘貼。

 

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