免费观看美国不卡一级黄色片-日本一区二区中文字幕无删减版-91在线国内在线播放高清-午夜av高清在线观看

預存
Document
當前位置：文庫百科 ? 文章詳情
蛋白質免疫印跡實驗WB的關鍵步驟精講與演示
來源： 時間：2024-08-14 10:16:25 瀏覽：1320次

蛋白質免疫印跡實驗WB的關鍵步驟精講與演示

 

蛋白質免疫印跡實驗（Western Blotting, WB）是一種用于檢測特定蛋白質在樣品中的表達情況的技術；它結合了電泳、蛋白質轉移、抗原抗體反應和顯色反應等多個步驟，具有高度的靈敏性和特異性。

一、概述

蛋白質免疫印跡實驗的基本原理是將蛋白質通過電泳分離后，轉移至固相載體上，然后利用特異性抗體與目標蛋白質結合，并通過顯色反應或其他檢測手段揭示目標蛋白質的存在和相對含量。

二、關鍵步驟

1. 樣品準備：蛋白質提取：從細胞或組織中提取蛋白質，通常使用含有去污劑和蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液。蛋白質定量：使用Bradford法、BCA法或Lowry法等對提取的蛋白質進行定量。

2. 蛋白質電泳：制備SDS-PAGE凝膠：根據(jù)蛋白質的分子量選擇合適的凝膠濃度。加樣：將蛋白質樣品與上樣緩沖液混合后，上樣至凝膠中。電泳：在電泳儀中進行電泳，蛋白質根據(jù)分子量大小在凝膠中分離。

3. 蛋白質轉移：準備轉移膜：通常使用PVDF膜或硝酸纖維素膜。轉移裝置：將凝膠、轉移膜和濾紙組裝在轉移裝置中。電轉移：在轉移緩沖液中，通過電場作用將蛋白質從凝膠轉移至膜上。

4. 封閉：使用含牛血清白蛋白（BSA）或脫脂奶粉的封閉液封閉膜上的非特異性結合位點，減少背景信號。

5. 抗體孵育：一抗孵育：使用特異性一抗與目標蛋白質結合，通常在4°C過夜孵育。洗膜：使用TBST或PBS緩沖液洗去未結合的一抗。二抗孵育：加入帶有酶標記的二抗，與一抗結合，室溫孵育1-2小時。

6. 顯色反應：使用化學發(fā)光底物或酶底物，通過顯色反應產(chǎn)生信號，揭示目標蛋白質的位置和相對含量。使用X光膠片或CCD相機拍攝圖像，進行定量分析。

三、注意事項與技巧

1. 確保樣品、抗體和試劑的質量，避免交叉污染。

2. 控制電泳和轉移條件，確保蛋白質分離和轉移的效果。

3. 優(yōu)化抗體孵育條件，包括抗體濃度和孵育時間。

4. 顯色反應時，注意底物的濃度和反應時間，避免過度顯色。

四、應用

蛋白質免疫印跡實驗廣泛應用于基礎研究、臨床診斷、藥物開發(fā)等領域，用于檢測蛋白質的表達、修飾、相互作用等。

 

評論 / 文明上網(wǎng)理性發(fā)言
12條評論
全部評論 / 我的評論
最熱 /  最新
全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具?，F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
點贊12
回復
全部
查看更多評論
相關文章

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應用技術

2023-10-08

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

接觸角測試（CA）的原理、樣品制備要求及實際應用

2023-11-16

一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

2023-11-23

恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

2022-08-12

TMA技術的基本概念、應用領域以及實際操作中的要點

2023-12-06

項目推薦/Project
蛋白印跡實驗（WB）

蛋白印跡實驗（WB）

熱門文章/popular

基礎理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構）

晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式：基礎篇

【科研干貨】電化學表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學實驗基礎之電化學工作站篇 （二）三電極和兩電極體系的搭建 和測試

【科研干貨】電化學表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |