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冷凍切片技術(shù)在TEM樣品制備中的關(guān)鍵作用
來源: 時間:2023-12-04 15:48:30 瀏覽:2417次

冷凍切片技術(shù)在TEM樣品制備中的關(guān)鍵作用

 

冷凍切片技術(shù)是一種在超低溫條件下對樣品進(jìn)行切片的方法,它能夠保持樣品的原始形態(tài)和結(jié)構(gòu),從而為TEM提供了高質(zhì)量的觀察材料。

 


 

一、技術(shù)原理

冷凍切片技術(shù)是利用液氮或液氦將樣品快速冷卻至低溫,使水分迅速凝固,從而使組織或細(xì)胞結(jié)構(gòu)固定并保持原始形態(tài),在冷凍過程中,樣品中的水分會形成冰晶,這些冰晶可以在一定程度上支撐和保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu),防止其在切片過程中受到破壞。

 

二、制樣流程

1. 樣品采集:采集新鮮的生物組織或細(xì)胞樣品,盡量減少樣品擱置時間,以保持其原始狀態(tài)。

2. 固定:將采集好的樣品用固定劑進(jìn)行固定,如戊二醛、多聚甲醛等,以保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

3. 清洗:將固定好的樣品用PBS緩沖液進(jìn)行清洗,去除多余的固定劑和雜質(zhì)。

4. 脫水:將清洗后的樣品用不同濃度的酒精或丙酮進(jìn)行梯度脫水,以去除樣品中的自由水。

5. 滲透:將脫水后的樣品用包埋劑(如環(huán)氧樹脂)進(jìn)行滲透,使其充滿整個樣品。

6. 包埋:將滲透后的樣品用樹脂進(jìn)行包埋,使其具有足夠的硬度進(jìn)行切片。

7. 切片:使用冷凍切片機將包埋好的樣品切成薄片,一般厚度為4-20μm。

8. 貼片:將切好的切片粘貼到處理好的載玻片上,使其平整均勻。

9. 干燥:將貼好的切片進(jìn)行干燥處理,一般采用室溫干燥1小時。

10. 染色:根據(jù)需要,對切片進(jìn)行染色,如使用金屬鹽類進(jìn)行電子染色。

 

三、在TEM中的應(yīng)用

冷凍切片技術(shù)在TEM樣品制備中具有重要作用,其主要體現(xiàn)在以下幾個方面:

1. 保持原始形態(tài):冷凍切片技術(shù)能夠保持樣品的原始形態(tài)和結(jié)構(gòu),使TEM觀察更加準(zhǔn)確。

2. 提高樣品質(zhì)量:冷凍切片技術(shù)可以減少樣品在制備過程中的損傷,提高TEM樣品的質(zhì)量。

3. 廣泛應(yīng)用于生物學(xué)領(lǐng)域:冷凍切片技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物學(xué)領(lǐng)域,如研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、脂肪、神經(jīng)組織等。

4. 快速制片:冷凍切片技術(shù)具有快速制片的特點,有利于臨床診斷和科學(xué)研究。

 

通過冷凍切片技術(shù)制備的樣品,可以保持原始形態(tài)和結(jié)構(gòu),為TEM提供了高質(zhì)量的觀察材料,隨著冷凍切片技術(shù)的發(fā)展,其在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究將越來越廣泛,然而,冷凍切片技術(shù)也存在一些挑戰(zhàn),如對設(shè)備和技術(shù)要求較高,操作過程中需要嚴(yán)格控制溫度和濕度等;因此,進(jìn)一步優(yōu)化冷凍切片技術(shù),提高其制備樣品的質(zhì)量和效率,是當(dāng)前研究的重要方向。

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具。現(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會。
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