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氨基酸分析儀的介紹和基本原理、應(yīng)用
來(lái)源: 時(shí)間:2022-12-05 10:35:25 瀏覽:4529次


用來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的測(cè)定的儀器,稱為氨基酸分析儀。必須先蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸,然后再進(jìn)行氨基酸分析。其是以陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定為基準(zhǔn)的離子交換色譜儀。
和普通HPLC相比較,儀器有著相似的基本結(jié)構(gòu)。然而針對(duì)氨基酸分析進(jìn)行了如氮?dú)獗Wo(hù)、惰性管路、在線脫氣、洗脫梯度及柱溫梯度控制等細(xì)節(jié)優(yōu)化。

簡(jiǎn)介



基本原理

氨基酸混合物在流動(dòng)相(緩沖溶液)的推動(dòng)下從裝有陽(yáng)離子交換樹脂的色譜柱流經(jīng)流經(jīng),各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)交換離子。當(dāng)洗脫時(shí)使用的pH緩沖溶液不同時(shí),氨基酸混合物由于不同的交換能力而分離,分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑發(fā)生反應(yīng),生成紫色化合物或黃色化合物,其在570nm、440rnn的吸光度用可見光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。這些有色產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度與洗脫出來(lái)的各氨基酸濃度之間的關(guān)系和朗伯-比爾定律相符合。以此為依據(jù)可以定性、定量分析氨基酸各組分氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測(cè)。此檢測(cè)方法不需要柱前或柱后衍生待測(cè)氨基酸。

系統(tǒng)

一般細(xì)分為蛋白水解分析系統(tǒng)(鈉鹽系統(tǒng))和游離氨基酸分析系統(tǒng)(鋰鹽系統(tǒng))兩種系統(tǒng)。梯度洗脫利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰來(lái)進(jìn)行。在這當(dāng)中,鈉鹽系統(tǒng)每次分析的氨基酸至多能夠達(dá)到大約25種。有比較快的速度以及比較好的基線平直度;鋰鹽系統(tǒng)每次分析的氨基酸至多能夠達(dá)到大約50種,然而和鈉鹽系統(tǒng)相比,速度比較慢,也沒有較好的基線平直度。

效果

相比較于目前已知的氨基酸分析方法,和HPLC柱前衍生方法相比較,除了靈敏度(Zdi檢測(cè)限)稍低以外,在如分離度、重現(xiàn)性、操作簡(jiǎn)便性、運(yùn)行成本等其他方面,都比其他分析方法要好。

特點(diǎn)

1、高靈敏度:

按照蛋白水解液標(biāo)準(zhǔn)作為例子,能夠檢測(cè)到3pmoL。


2、快速、高分辨率:

水解氨基酸僅需半個(gè)小時(shí)的分析時(shí)間,生理體液僅需110分鐘。


3.柱后衍生技術(shù):

和氨基酸反應(yīng)之前才混合兩種反應(yīng)液,使反應(yīng)液的使用期限得到了有效的延長(zhǎng),并且不需要額外的制冷裝置存放。


4、氨氣排除系統(tǒng):

除氨柱増加了,能夠?qū)痹诜治鲞^程中對(duì)基線及峰形的干擾很好地進(jìn)行排除。

應(yīng)用

(一)農(nóng)業(yè)、食品、飲料及其它

檢驗(yàn)測(cè)定茶氨酸來(lái)鑒別真?zhèn)尾枞~

對(duì)醬油級(jí)別的認(rèn)定

對(duì)玉米、大豆、小麥等農(nóng)作物的氨基酸含量進(jìn)行檢測(cè)

對(duì)果汁、飲料進(jìn)行真?zhèn)蔚蔫b別


(二)飼料上的應(yīng)用

真?zhèn)舞b別

賴氨酸、蛋氨酸含量高是魚粉氨基酸組成特點(diǎn),真?zhèn)瓮ㄟ^對(duì)氨基酸的分析很容易就可以辨別


質(zhì)量控制

各種飼料必需氨基酸的含量和它們之間的比例必須恰當(dāng),為了使質(zhì)量得到保證,需要對(duì)原料和產(chǎn)品中的氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定。


(三)醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用

必需氨基酸在創(chuàng)傷愈合中的關(guān)系

腫瘤組織氨基酸代謝的變化規(guī)律

氨基酸代謝異常角度闡述了氨基酸與肝性腦病的關(guān)系

血清中11種游離氨基酸的降低可直接影響人體組織的正常發(fā)育、生長(zhǎng)

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文字是人類用符號(hào)記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語(yǔ)言的工具。人類往往先有口頭的語(yǔ)言后產(chǎn)生書面文字,很多小語(yǔ)種,有語(yǔ)言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國(guó)家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
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