免费观看美国不卡一级黄色片-日本一区二区中文字幕无删减版-91在线国内在线播放高清-午夜av高清在线观看

預(yù)存
Document
當(dāng)前位置：文庫百科 ? 文章詳情
實(shí)驗(yàn)筆記丨免疫組織化學(xué)染色（IHC）步驟詳解
來源： 時(shí)間：2022-11-02 15:34:07 瀏覽：3097次

免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)）。


包埋組織

在４％多聚甲醛溶液中固定組織48小時(shí)后，放入一次性組織包埋盒中脫水，浸蠟后包埋。


修片


修剪石蠟切片，直至將石蠟切片修到大部分組織在切面上。

組化


3.1 蠟塊制備

將組織蠟塊提前泡到冰水混合物中使其變軟，將組織蠟塊放在切片機(jī)上切出５微米的切片，60°Ｃ烘片１小時(shí)。


3.2 脫蠟

１）將切片放到60°Ｃ烘箱中烘片４ｈ以上。

２）在二甲苯I里置入片子，持續(xù)0.5 h，再置于二甲苯II，依然持續(xù)0.5 h。


3.3 水化

１）通過酒精，浸泡切片，酒精濃度不一，分為７０％、８０％、９０％、９５％、１００％，各濃度浸泡時(shí)間也有所差異，前３個(gè)濃度都是各自浸泡２分鐘，后面兩個(gè)濃度分別浸泡5分鐘、10分鐘。

２）最后將片子放到雙蒸水中浸泡２min。


3.4 組化

１）封閉處理：選擇內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑，處理時(shí)間為20 min。

２）用雙蒸水浸泡三次，單次時(shí)間5 min。

３）抗原修復(fù)：準(zhǔn)備pH＝6.0的10 nM檸檬酸抗原修復(fù)液400-600 ml，把片子放到里面，用保鮮膜封住燒杯口防止沸騰溢出。之后放到微波爐中用高火加熱10 min。

４）加熱后用雙蒸水補(bǔ)齊液面，在微波爐中加熱40 min（中低火至解凍之間），每隔10 min用雙蒸水補(bǔ)齊液面。

５）修復(fù)結(jié)束后，放到室溫下，使其自然冷卻。

６）DDW清洗180＂之后，通過PBS清洗，３分鐘／次，進(jìn)行三次。

７）通過一抗封閉，保持４°Ｃ，第二天進(jìn)行溫度回升，為37°Ｃ，然后通過PBS清洗，持續(xù)５分鐘。

８）在其中添加反應(yīng)增強(qiáng)液，然后孵育，室溫條件，持續(xù)20 min，再通過PBS清洗，３分鐘／次，進(jìn)行三次。

９）加入增強(qiáng)酶標(biāo)山羊抗小鼠／兔IgG聚合物，然后孵育，室溫條件，持續(xù)20 min，再通過PBS清洗，3分鐘／次，進(jìn)行三次。

1０）滴加DAB顯色液（現(xiàn)用現(xiàn)配、比例1:19），室溫孵育2-10 min（根據(jù)不同的抗體自行選擇染色時(shí)間）。用自來水輕輕沖洗掉。

１１）復(fù)染：加蘇木精染色50 s。用DDW，3 min，PBS，５min X３次。

１２）脫水：將片子依次浸泡到不同濃度的酒精梯度中：７０％，ｌｍｉｎ—８０％，ｌｍｉｎ—９０％，1 ｍｉｎ—９５％ Ｉ，５ｍｉｎ—９５％ II ，５ｍｉｎ—１００％Ｉ，５ｍｉｎ—１００％ II，５ｍｉｎ。

１３）透明：利用二甲苯Ｉ、二甲苯 II 進(jìn)行處理，每次處理持續(xù)20 min。

１４）中性樹脂封片，中性樹脂，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干。

來源：科研日精進(jìn)

評(píng)論 / 文明上網(wǎng)理性發(fā)言
12條評(píng)論
全部評(píng)論 / 我的評(píng)論
最熱 /  最新
全部 3小時(shí)前 四川
文字是人類用符號(hào)記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?，F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國(guó)家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
點(diǎn)贊12
回復(fù)
全部
查看更多評(píng)論
相關(guān)文章

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

2020-05-03

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

2021-01-22

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

2021-06-19

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

2019-10-25

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

2019-10-25

Zeta電位的基本理論、測(cè)試方法和應(yīng)用

2020-08-24

熱門文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇 （二）三電極和兩電極體系的搭建 和測(cè)試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |