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細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)的目的及實(shí)驗(yàn)過程的注意事項(xiàng)

來源：時(shí)間：2022-08-22 15:04:27 瀏覽：4319次

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是測定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法，常用于抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)的常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成兩種。

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

平板克隆形成實(shí)驗(yàn)與軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)的區(qū)別在于前者操作簡便，可直接將細(xì)胞接種于培養(yǎng)器皿培養(yǎng)，細(xì)胞間泌的促生長因子可在培養(yǎng)液中擴(kuò)散，有助于克隆形成率的提高，適用于貼壁生長細(xì)胞。而軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基需添加軟瓊脂，以模擬體內(nèi)生長環(huán)境，適用于懸浮細(xì)胞。

細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵之一是細(xì)胞懸液的制備與接種密度，細(xì)胞一定要分散均勻，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過大。

2. 接種完畢后，需將培養(yǎng)基置于37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周，期間需每隔3 d換一次液，換液過程需緩慢加入培養(yǎng)基，避免將細(xì)胞吹起。

3. 當(dāng)肉眼可觀察到培養(yǎng)皿中出現(xiàn)克隆后終止培養(yǎng)，棄上清，用PBS小心沖洗2~3次，而后固定15 min、結(jié)晶紫染色20 min，洗去染色液后觀察計(jì)數(shù)，克隆形成率=（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）×100%。

4. 在軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)中，需配置下層軟瓊脂和上層軟瓊脂，前者是為防止細(xì)胞貼附生長，后者是作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑以及為防止下層瓊脂膠干燥。

5. 軟瓊脂與細(xì)胞液混合時(shí)溫度不宜超過40℃，否則將會(huì)燙傷/死細(xì)胞。

6. 瓊脂經(jīng)滅菌后應(yīng)分裝備用，反復(fù)加熱易導(dǎo)致瓊脂降解而產(chǎn)生毒性，且其硬度也會(huì)有所下降。

7. 不同細(xì)胞的生長能力有所差異，若細(xì)胞克隆率過低，可在培養(yǎng)基中添加胰島素等促克隆形成物質(zhì)。

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